Informace

9. 10: Retroviry: dvouvláknové RNA viry - biologie

9. 10: Retroviry: dvouvláknové RNA viry - biologie


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

9. 10: Retroviry: Dvouvláknové RNA viry

Použití sekvenování s vysokou propustností a dvou vstupních metod RNA k identifikaci virů infikujících rajčatové plodiny

K identifikaci virů na vzorcích rajčat vykazujících příznaky podobné virům jsme použili vysoce výkonné sekvenování. Vzorky byly odebrány z plodin na Pyrenejském poloostrově. Buď celková RNA nebo dvouvláknová RNA (dsRNA) byly použity jako výchozí materiál pro vytvoření knihoven cDNA. Celkem bylo identifikováno sedm druhů virů, z nichž nejhojnější je virus pepino mosaic. Vstup dsRNA poskytl lepší pokrytí a hloubku čtení, ale minul jeden druh viru ve srovnání s celkovým vstupem RNA. Provedením in silico analýz jsme určili minimální hloubku sekvenování na vzorek 0,2 a 1,5 milionu čtení pro vstupy dsRNA a rRNA-depletované celkové RNA, abychom detekovali i méně hojné viry. Byly navrženy primery a sondy TaqMan zaměřené na konzervované oblasti ve virových genomech a/nebo použity pro detekci virů. Všechny viry byly detekovány pomocí qRT-PCR/RT-PCR v jednotlivých vzorcích, přičemž všechny kromě jednoho vzorku vykazovaly smíšené infekce. Tři druhy virů (Latentní vir olivy 1, Virus nekrózy kroužků salátu a Virus skvrnitosti plodů rajčat) jsou zde poprvé uvedeny u plodin rajčat ve Španělsku.

Klíčová slova: LRNV OLV1 ToFBV dsRNA vysoce výkonné sekvenování (HTS) totální RNA z rajčat.

Prohlášení o střetu zájmů

Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

Obrázky

Bioinformatický pracovní tok pro detekci…

Bioinformatický pracovní postup pro detekci známých virů a pro objevování nových virů.…

Rostliny rajčat a ovoce vystavující…

Rostliny rajčat a plody vykazující příznaky podobné virům. ( A , B ) odpovídat ...

Porovnání průměrné hloubky čtení…

Porovnání průměrné hloubky čtení a procenta virových genomů pokrytých čtením ...


Objev a biogeneze mikroRNA

MicroRNA (miRNA) je řada malých nekódujících RNA, které typicky umlčují expresi genů různými mechanismy [1,2,3]. MiRNA jsou klíčovými faktory při regulaci genové exprese různých buněčných procesů, takže objev miRNA se ukazuje jako pozoruhodný průlom v molekulární biologii [4,5,6,7,8]. V roce 1993 vědci pozorovali MiRNA řádek-4 v Caenorhabditis elegans [2, 8]. V následných výzkumech byly v různých organismech objeveny další podobné malé regulační RNA. Bylo ukázáno, že malá RNA pocházela ze struktury vlásenky, které jsou částečně komplementární k 3 ‘netranslatovaným oblastem (UTR) jiných cílových transkriptů [9]. Tato vazba může vyvolat destabilizaci MRNA a translační represi, což má za následek pokles produkce proteinu [10, 11]. Odhaduje se, že miRNA mají vliv na 60 % genové exprese savců [12]. Nedávné studie ukazují, že miRNA produkují hlavní účinek v různých regulačních cestách, například v metabolismu, apoptóze, proliferaci a diferenciaci buněk, embryonálním vývoji, rakovině atd. [13, 14].

U savců se miRNA vytvářejí ve více krocích. Biogenezní dráha miRNA byla podrobně studována. Kanonické miRNA odvozené z transkriptů ve tvaru vlásenky (pri-miRNA), které jsou obvykle přepisovány RNA polymerázou II (pol II) [15]. Poté jsou prekurzorové miRNA (pre-miRNA) odštěpeny z větší pri-miRNA endonukleázou Drosha podobnou RNAse III [16]. Pri-miRNA je vedena prostřednictvím jaderného mikroprocesorového komplexu, který obsahuje dvouvláknovou RNA (dsRNA) rozlišující protein 8 kritické oblasti DiGeorge syndromu (DGCR8) a endonukleázu Drosha [17]. Poté je vlásenková pre-miRNA vynesena z jádra receptorem nukleárního transportu Exportin-5 a nakonec do cytoplazmy [18, 19]. Poté v přítomnosti endonukleázy Dicer podobné RNAse III jsou pre-miRNA po vstupu do cytoplazmy štěpeny [20]. Krátká duplexní RNA je generována štěpením zprostředkovaným dicerem. Během aktivačního procesu RNA-indukovaného umlčovacího komplexu (RISC) zůstává jedno vlákno duplexu zvaného miRNA stabilně spojeno do komplexu (RISC*) a provádí se jako sekvence specifická sonda zaměřující RISC* na komplementární mRNA [21]. Další vlákna se uvolňují, degradují a částečně komplementární cílové sekvence [22].


Obsah

Existují dva kmeny virů dsRNA: kmen Duplornaviricota a třída Duplopiviricetes, který je v kmeni Pisuviricota. Oba jsou součástí království Orthornavirae v říši Riboviria. Na základě fylogenetické analýzy RdRp tyto dva klady nesdílejí společného předka dsRNA, ale jsou místo toho odděleně pocházející z různých jednovláknových RNA virů s pozitivním smyslem. V baltimorském klasifikačním systému, který seskupuje viry dohromady na základě jejich způsobu syntézy mRNA, jsou viry dsRNA skupiny III. [2] [4]

Duplornaviricota Upravit

Duplornaviricota obsahuje většinu virů dsRNA, včetně reovirů, které infikují různorodou škálu eukaryotů, a cystoviry, což jsou jediné dsRNA viry, o nichž je známo, že infikují prokaryoty. Kromě RdRp viry v Duplornaviricota také sdílejí ikosahedrální kapsidy, které obsahují 60 homo- nebo heterodimerů kapsidového proteinu organizovaných na pseudo T = 2 mřížce. Kmen je rozdělen do tří tříd: Chrymotiviricetes, který obsahuje především plísňové a prvokové viry, Resentoviricetes, který obsahuje reoviry, a Vidaverviricetes, který obsahuje cystoviry. [2] [4]

Duplopiviricetes Upravit

Třída Duplopiviricetes je druhým kladu virů dsRNA a je v kmeni Pisuviricota, který také obsahuje pozitivní jednovláknové RNA viry. Duplopiviricetes většinou obsahuje rostlinné a houbové viry a zahrnuje následující čtyři rodiny: Amalgaviridae, Hypoviridae, Partitiviridae, a Picobirnaviridae. [2] [4]

Reoviridae Upravit

Reoviridae jsou v současné době rozděleny do devíti rodů. Genomy těchto virů se skládají z 10 až 12 segmentů dsRNA, z nichž každý obecně kóduje jeden protein. Zralé viriony jsou neobalené. Jejich kapsidy, tvořené více proteiny, mají ikosaedrickou symetrii a jsou uspořádány obecně v soustředných vrstvách. Charakteristickým rysem virů dsRNA, bez ohledu na jejich rodinnou asociaci, je jejich schopnost provádět transkripci segmentů dsRNA za vhodných podmínek v kapsidě. U všech těchto virů jsou tedy enzymy potřebné pro endogenní transkripci součástí struktury virionů. [3]

Orthoreoviry Upravit

Orthoreoviry (reoviry) jsou prototypickými členy viru Reoviridae rodina a zástupce členů věže, které tvoří asi polovinu rodů. Stejně jako ostatní členové rodiny jsou reoviry neobalené a charakterizované soustřednými kapsidovými obaly, které enkapsidují segmentovaný genom dsRNA. Zejména má reovirus osm strukturních proteinů a deset segmentů dsRNA. Vstup a replikaci buňky doprovází řada kroků odlakování a konformačních změn. Struktury s vysokým rozlišením jsou známé pro téměř všechny proteiny savčího reoviru (MRV), což je nejlépe prozkoumaný genotyp. Elektronová kryomikroskopie (cryoEM) a rentgenová krystalografie poskytly množství strukturních informací o dvou specifických kmenech MRV, Lang (T1L) typu 1 a Dearing typu 3 (T3D). [5]

Upravit cypovirus

Viry cytoplazmatické polyedrózy (CPV) tvoří rod Cypovirus z rodiny Reoviridae. CPV jsou klasifikovány do 14 druhů na základě elektroforetických migračních profilů jejich genomových segmentů. Cypovirus má pouze jednu kapsidovou skořápku, která je podobná vnitřnímu jádru ortoroviru. CPV vykazuje pozoruhodnou stabilitu kapsidy a je plně schopen transkripce a zpracování endogenní RNA. Celkové záhyby proteinů CPV jsou podobné záhybům jiných reovirů. Proteiny CPV však mají inzerční domény a jedinečné struktury, které přispívají k jejich rozsáhlým mezimolekulárním interakcím. Věžičkový protein CPV obsahuje dvě domény methylázy s vysoce konzervativním sendvičovým záhybem dvojice šroubovice/β-list/šroubovice, ale postrádá klapku β-barel přítomnou v ortoroviru λ2. Skládání funkčních domén proteinů věží a přítomnost zúžení a hrotů A podél dráhy uvolňování mRNA naznačuje mechanismus, který využívá póry a kanály k regulaci vysoce koordinovaných kroků transkripce, zpracování a uvolňování RNA. [6]

Úpravy rotavirů

Rotavirus je celosvětově nejčastější příčinou akutní gastroenteritidy u kojenců a malých dětí. Tento virus obsahuje genom dsRNA a je členem Reoviridae rodina. Genom rotaviru se skládá z jedenácti segmentů dsRNA. Každý segment genomu kóduje jeden protein s výjimkou segmentu 11, který kóduje dva proteiny. Mezi dvanácti proteiny je šest strukturálních a šest nestrukturálních proteinů. [7] Jde o dvouvláknový RNA neobalený virus

Virus katarální horečky ovcí Upravit

Členové rodu Orbivirus v rámci Reoviridae rodiny jsou viry přenášenými členovci a jsou zodpovědné za vysokou nemocnost a úmrtnost přežvýkavců. Virus katarální horečky ovcí (BTV), který způsobuje onemocnění hospodářských zvířat (ovce, kozy, skot), byl v popředí molekulárních studií za poslední tři desetiletí a nyní představuje nejlépe pochopený orbivirus na molekulární a strukturální úrovni. BTV, stejně jako ostatní členové rodiny, je komplexní neobalený virus se sedmi strukturními proteiny a genomem RNA sestávajícím z 10 různě velkých segmentů dsRNA. [8] [9]

Phytoreoviry Upravit

Fytoreoviry jsou neturretované reoviry, které jsou hlavními zemědělskými patogeny, zejména v Asii. Jeden člen této rodiny, Rice Dwarf Virus (RDV), byl rozsáhle studován elektronovou kryomikroskopií a rentgenovou krystalografií. Z těchto analýz byly odvozeny atomové modely kapsidových proteinů a věrohodný model pro sestavení kapsidů. Zatímco strukturní proteiny RDV nesdílejí žádnou sekvenční podobnost s jinými proteiny, jejich záhyby a celková struktura kapsidů jsou podobné jako u jiných proteinů Reoviridae. [10]

Saccharomyces cerevisiae virus L-A Upravit

L-A dsRNA virus kvasinek Saccharomyces cerevisiae má jeden genomový segment 4,6 kb, který kóduje jeho hlavní obalový protein, Gag (76 kDa) a fúzní protein Gag -Pol (180 kDa) tvořený -1 ribozomálním posunem rámce. L-A může podporovat replikaci a enkapsidaci v oddělených virových částicích kterékoli z několika satelitních dsRNA, nazývaných M dsRNA, z nichž každá kóduje sekretovaný proteinový toxin (zabijácký toxin) a imunitu vůči tomuto toxinu. L-A a M jsou přenášeny z buňky do buňky cytoplazmatickým mícháním, ke kterému dochází v procesu páření. Žádný z nich není přirozeně uvolňován z buňky nebo do buněk vstupuje jinými mechanismy, ale vysoká frekvence páření kvasinek v přírodě vede k široké distribuci těchto virů v přírodních izolátech. Navíc strukturální a funkční podobnosti s dsRNA viry savců umožnily považovat tyto entity za viry. [11]

Virus infekční bursální choroby Edit

Virus infekční burzální choroby (IBDV) je nejlépe charakterizovaným členem rodiny Birnaviridae. Tyto viry mají bipartitní dsRNA genomy uzavřené v jednovrstvých ikosaedrických kapsidách s T = geometrie 13l. IBDV sdílí funkční strategie a strukturální rysy s mnoha dalšími ikosahedrálními dsRNA viry, kromě toho, že postrádá T = 1 (nebo pseudo T = 2) jádro společné pro Reoviridae, Cystoviridae, a Totiviridae. IBDV kapsidový protein vykazuje strukturní domény, které vykazují homologii s těmi z kapsidových proteinů některých jednovláknových RNA virů s pozitivním smyslem, jako jsou nodaviry a tetraviry, stejně jako T = 13 kapsidových obalových proteinů Reoviridae. The T = 13 obal IBDV kapsidy je tvořen trimery VP2, což je protein generovaný odstraněním C-koncové domény z jejího prekurzoru, pVP2. Úprava pVP2 se provádí na nezralých částicích jako součást procesu zrání. Další hlavní strukturní protein, VP3, je multifunkční složka ležící pod T = 13 shell, který ovlivňuje inherentní strukturní polymorfismus pVP2. Virusem kódovaná RNA polymeráza závislá na RNA, VP1, je začleněna do kapsidy prostřednictvím asociace s VP3. VP3 také značně interaguje s genomem virové dsRNA. [12]

Bacteriophage Φ6 Upravit

Bakteriofág Φ6, je členem Cystoviridae rodina. Infikuje Pseudomonas bakterie (typicky rostlinné patogenní). P. syringae). Má třídílný, segmentovaný, dvouvláknový RNA genom, celkem

13,5 kb na délku. Φ6 a jeho příbuzní mají kolem svého nukleokapsidu lipidovou membránu, což je vzácná vlastnost mezi bakteriofágy. Je to lytický fág, i když za určitých okolností bylo pozorováno, že vykazuje zpoždění v lýze, které lze popsat jako "stav nosiče". [13]

Protože buňky během normálního metabolismu nukleových kyselin neprodukují dvouvláknovou RNA, přirozený výběr upřednostnil vývoj enzymů, které při kontaktu ničí dsRNA. Nejznámější třídou tohoto typu enzymů je Dicer. Doufáme, že by bylo možné syntetizovat širokospektrální antivirotika, která by využila této zranitelnosti dvouvláknových RNA virů. [14]


Příklady

Nejznámějším retrovirem, který infikuje člověka, je HIV. Existuje však několik dalších lidských retrovirů. Patří mezi ně lidský T-buněčný lymfotropní virus 1 (HTLV-1). HTLV-1 je spojen s určitými T-buněčnými leukémiemi a lymfomy. Existuje mnoho dalších retrovirů, které byly identifikovány jako infikující jiné druhy.

Léčba HIV je jedním z důvodů, proč se lidé s pojmem retroviry blíže seznámili. Inhibitory reverzní transkriptázy tvoří některé z dobře známých tříd léků proti HIV.

Inhibitory reverzní transkriptázy zabraňují integraci HIV do genomu hostitelské buňky. To zase brání buňce vytvářet kopie viru a zpomaluje postup infekce. Narůstají však problémy s rezistencí vůči mnoha lékům v těchto třídách.

Retroviry se také někdy používají jako metody přenosu genů během genové terapie. Důvodem je, že tyto viry lze snadno upravit a snadno integrovat do hostitelského genomu.

To znamená, že je teoreticky lze použít k tomu, aby buněčný aparát průběžně vyráběl proteiny. Vědci například použili retroviry na pomoc diabetickým potkanům při výrobě vlastního inzulínu.


Vrozená imunita nádoru vyvolaná specifickými interferonem stimulovanými endogenními retroviry

Subpopulace mezenchymálních nádorů vylučují protumorogenní cytokiny a podporují rezistenci na léčbu1-4. Tento fenomén se podílí na chemorefrakterním malobuněčném karcinomu plic a rezistenci vůči cíleným terapiím 5-8, ale zůstává neúplně definován. Zde identifikujeme podtřídu endogenních retrovirů (ERV), které v těchto buňkách zapojují vrozenou imunitní signalizaci. Stimulované 3 primární antisense retrovirové kódující sekvence (SPARCS) jsou orientovány inverzně ve 3 'nepřekládaných oblastech specifických genů obohacených o regulaci pomocí STAT1 a EZH2. Dereprese těchto lokusů vede ke generování dvouvláknové RNA po expozici IFN-y v důsledku obousměrné transkripce z promotoru genu aktivovaného STAT1 a 5 'dlouhého koncového opakování antisense ERV. Zapojení MAVS a STING aktivuje downstream signalizaci TBK1, IRF3 a STAT1 a udržuje kladnou zpětnou vazbu. Indukce SPARCS v lidských nádorech je úzce spojena s expresí hlavního histokompatibilního komplexu třídy 1, mezenchymálními markery a downregulací enzymů modifikujících chromatin, včetně EZH2. Analýza buněčných linií s vysokou indukovatelnou expresí SPARCS odhaluje silnou asociaci se stavem mezenchymálních buněk pozitivním na AXL/MET. Zatímco nádory s vysokým SPARCS jsou imunitně infiltrované, vykazují také četné rysy mikroprostředí s potlačenou imunitou. Tato data společně odhalují podtřídu ERV, jejichž dereprese spouští patologickou vrozenou imunitní signalizaci rakoviny, s důležitými důsledky pro imunoterapii rakoviny.

Prohlášení o střetu zájmů

Výkaz konkurenčního finančního zájmu

D.A.B. je konzultantem pro N-of-One.

Obrázky

Objev podtřídy indukovatelné IFN…

Objev IFN indukovatelné podtřídy ERV. ( A ) Imunoblot pTBK1,…

Exprese SPARCS je indukovatelná a…

Exprese SPARCS je indukovatelná a spouští amplifikaci pozitivní zpětné vazby. ( A ) Izotyp…

Exprese genů obsahujících SPARCS napříč…

Exprese genů obsahujících SPARCS napříč rakovinami. ( A ) ssGSEA genu SPARCS obsahujícího…

Genová exprese obsahující SPARCS je spojena…

Genová exprese obsahující SPARCS je spojena s adaptivními a imunitní supresivními podpisy. ( A…


Mechanismus

Mechanismus translace RNA do proteinu se provádí ve třech krocích: iniciace, elongace a terminace. Během iniciace se tRNA a ribozom spojí s mRNA. Start kodon, AUG, kóduje methionin a bude vždy první aminokyselinou v sekvenci. Po zahájení se ribozom pohybuje podél mRNA ve směru 5 ’-3 ’, čte kodony a váže tRNA nesoucí příslušné aminokyseliny, pro které kodony kódují. Sekvence aminokyselin se postupně prodlužuje a končí po dosažení stop kodonu. Stop kodony jsou UAG, UAA a UGA. Polypeptid je poté uvolněn z ribozomálního komplexu a modifikován na aktivní protein. V eukaryotických buňkách dochází k translaci po transkripci, zatímco v prokaryotických buňkách dochází k transkripci a translaci   současně.  


Polarita genomu RNA virů odráží různé evoluční tlaky formující využití kodonů

RNA viry jsou klasifikovány podle jejich polarity genomu a replikačních strategií. Složení nukleotidů a využití kodonů se mezi skupinami virů liší, například pozitivní RNA viry (+ssRNA) mají vyšší obsah GC než ostatní skupiny RNA virů. Použití kodonů u +ssRNA virů je blíže lidem, kteří vykazují významně vyšší index adaptace kodonů (CAI) než u RNA s negativním smyslem (-ssRNA), dvouvláknové RNA (dsRNA) a retrovirů. Viry Ambisense mají vysoký CAI srovnatelný s virem +ssRNA navzdory jejich nižšímu obsahu GC, zatímco viry dsRNA mají nejnižší CAI. To může poskytnout výhodu pro +ssRNA viry, protože jejich genomy jsou použity jako mRNA. Analýzy vlivu složení nukleotidů na využití kodonů však neprokázaly rozdíl mezi +ssRNA a -ssRNA viry. To naznačuje, že složení genomu a tedy i mutační tlak zůstávají hlavním tlakem způsobujícím rozdíly v použití kodonů mezi RNA viry s různými typy genomů.


Výzkum zachycuje dvouvláknový RNA virus při transkripci

Výzkumníci pod vedením Hong Zhou (vlevo nahoře) zjistili, že virus dsRNA využívá proteiny na svém povrchu ke snímání svého prostředí a že když jsou podmínky optimální, tyto proteiny zapnou spínač uvnitř viru.

V samostatných studiích publikovaných v recenzovaných časopisech eLife a PřírodaVědci z California NanoSystems Institute při UCLA odhalili trojrozměrnou atomovou strukturu viru dvouvláknové RNA nebo dsRNA. Výzkum poprvé demonstruje, jak viry snímají podmínky prostředí uvnitř hostitelské buňky, aby spustily transkripci, a představuje klíčová zjištění o tom, jak je genom dsRNA organizován uvnitř mechanismu viru a RNA pro vlastní replikaci.

Vědci také objevili biologický nano-spínač, který zapíná transkripci-proces, při kterém se RNA sama replikuje-a porovnávali strukturu přepínače ve stavech „vypnuto“ a „zapnuto“, aby určili, proč jej podmínky prostředí aktivují.

Nyní vědí, že virus dsRNA používá proteiny na svém povrchu ke snímání svého prostředí a že když jsou podmínky optimální, tyto proteiny zapnou spínač uvnitř viru prostřednictvím dráhy přenosu signálu. Tím se aktivuje transkripce RNA.

Výzkum vedl Hong Zhou, profesor mikrobiologie, imunologie a molekulární genetiky a ředitel fakulty elektronového zobrazovacího centra pro nanomachiny UCLA. U obou studií vědci analyzovali virus cytoplazmatické polyhedrózy nebo CPV, který infikuje hmyz. Zhou řekl, že se tým zaměřil na CPV, protože je to nejjednodušší virus dsRNA.

„Vzhledem k tomu, že se RNA dostala před DNA, mohou takovéto studie osvětlit základní otázky o nejranějších fázích evoluce, například o tom, jak a kdy se RNA poprvé replikovala,“ řekl Zhou. "A protože CPV může replikovat a přepisovat svou RNA v intaktním viru a v nepřítomnosti buněk, poskytuje skvělý nástroj pro zkoumání transkripce RNA v akci a na atomové úrovni."

Studie jsou vyvrcholením výzkumu, který Zhou zahájil se svými kolegy v 90. letech minulého století, kdy byly elektronové mikroskopy mnohem méně výkonné než dnes.

Dvouvláknové RNA viry jsou největší rodinou virů (jiné zahrnují retroviry a papilomaviry). Jedním dobře známým virem dsRNA je rotavirus, který způsobuje průjem u lidí a každý rok zabije půl milionu lidí na celém světě, většinou dětí v rozvojových zemích.

Vysvětlení vědců z UCLA o procesu, kterým se replikuje dsRNA – a podmínkách, ve kterých k tomu dochází – dává vědcům cíle pro nové léky, které by mohly být vyvinuty pro boj s viry dsRNA.

Biologické komplexy v nanoúrovni, jako jsou viry, jsou pro vědce obtížně viditelné, protože jejich mizivě malé velikosti. Abychom uvedli jejich rozměry do souvislostí: Rozdíl ve velikosti mezi virovou částicí a fotbalovým míčem je přibližně stejný jako rozdíl mezi fotbalovým míčem a planetou Zemí.

Obě studie byly provedeny pomocí kryo elektronového mikroskopu UCLA Titan Krios, vysoce sofistikovaného stroje, ve kterém jsou bleskově zmrazené biologické vzorky uchovávány v jejich původním stavu. Nedávné pokroky v kryoelektronové mikroskopii umožnily vědcům vytvořit – s bezprecedentními detaily na atomové úrovni – 3D snímky, které jsou schopné odhalit chemii ovládající sestavování biologických komplexů.

Aktivace transkripce

The eLife studie zjistila, že malá molekula zvaná S-adenosyl-L-methionin nebo SAM může aktivovat transkripci vazbou na protein věže na obalu viru.

Vědci poprvé objevili, že když se SAM naváže na jednu oblast proteinu věže, změní se obal viru, což umožní další oblasti proteinu věže vázat malou molekulu zvanou ATP a rozložit ji. Energie uvolněná z rozkladu ATP způsobuje další změny ve skořápce, které aktivují transkripci RNA.

Hlavním autorem studie byl Xuekui Yu, vědec projektu UCLA v oblasti mikrobiologie, imunologie a molekulární genetiky.

Organizace genomu dsRNA

V Příroda Výzkumníci zobrazili organizaci genomu dsRNA a proteinů uvnitř viru. Poté zachytili obrázky procesu transkripce porovnáním struktury před a po.

Xing Zhang, hlavní autor studie a vědecký ředitel UCLA Electron Imaging Center for Nanomachines, uvedl, že viry jsou „chytré“ - zdá se, že vědí, jak se vyhnout replikaci, když není produktivní, protože se neaktivují, pokud nejsou splněny všechny klíčové podmínky jsou přítomny mimo prostředí viru. Když začne transkripce, segmenty vznikající RNA se uvolní do vnitřního prostředí buňky, kde se sbalí do proteinových obalů a vytvoří nové viry. Tyto nové viry opouštějí buňku, šíří se do dalších buněk a celý proces začínají znovu.

Xuekui Yu a kol. Předpokládaná ATPáza zprostředkovává transkripci RNA a uzavření viru dsRNA, eLife (2015). DOI: 10,7554/eLife.07901


Reference

Holmes, E.C. Evoluce a vznik RNA virů (Oxford Univ. Press, New York, 2009).

Brown, D. W. Hrozba pro člověka virovými infekcemi subhumánních primátů. Rev. Med. Virol. 7, 239–246 (1997).

Gibbs, M. J. & amp Weiller, G. F. Důkaz, že rostlinný virus změnil hostitele, aby infikovali obratlovce, a poté rekombinoval s virem infikujícím obratlovce. Proč. Natl Acad. Sci. USA 96, 8022–8027 (1999).

Khatchikian, D., Orlich, M. & amp Rott, R. Zvýšená virová patogenita po vložení 28S ribozomální sekvence RNA do genu hemaglutininu viru chřipky. Příroda 340, 156–157 (1989).

Malim, M. H. & amp Emerman, M. Variace sekvence HIV-1: drift, shift a útlum. Buňka 104, 469–472 (2001).

Nora, T. a kol. Příspěvek rekombinace k vývoji virů lidské imunodeficience vyjadřujících rezistenci k antiretrovirové léčbě. J. Virol. 81, 7620–7628 (2007).

Lai, M. M. RNA rekombinace v živočišných a rostlinných virech. Mikrobiol. Rev. 56, 61–79 (1992).

Aaziz, R. & Tepfer, M. Rekombinace v RNA virech a v transgenních rostlinách odolných vůči virům. J. Gen. Virol. 80, 1339–1346 (1999).

Breyer, W. A. ​​& Matthews, B. W. Strukturální základ pro procesivitu. Protein Sci. 10, 1699–1711 (2001).

Von Hippel, P. H., Fairfield, F. R. & Dolejsi, M. K. On the processivity of polymerases. Ann. NY Acad. Sci. 726, 118–131 (1994).

Baird, H. A. a kol. Sekvenční determinanty umístění bodu zlomu během mezisubtypové rekombinace HIV-1. Nucleic Acids Res. 34, 5203–5216 (2006).

Galetto, R., Giacomoni, V., Véron, M. & amp Negroni, M. Disekce ohraničeného horkého místa rekombinace v HIV-1 po jediném infekčním cyklu. J. Biol. Chem. 281, 2711–2720 (2006).

Zhang, J. & amp. Temin, H. M. Retrovirová rekombinace závisí na délce identity sekvence a není náchylná k chybám. J. Virol. 68, 2409–2414 (1994).

Worobey, M. & Holmes, E. C. Evoluční aspekty rekombinace v RNA virech. J. Gen. Virol. 80, 2535–2543 (1999). Přehled frekvence rekombinace u RNA virů se zaměřením zejména na použití fylogenetických metod k prozkoumání této charakteristiky.

Huang, A. S. & Baltimore, D. Defektní virové částice a procesy virových onemocnění. Příroda 226, 325–327 (1970).

Roux., L., Simon, A. E. & Holland, J. J. Účinky defektních interferujících virů na replikaci a patogenezi virů in vitro a in vivo. Adv. Virus Res. 40, 181–211 (1991).

Lazzarini, R. A., Keene, J. D. & Schubert, M. Původ defektních interferujících částic virů RNA s negativním vláknem. Buňka 26, 145–154 (1981).

Chetverin, A. B., Chetverina, H. V., Demidenko, A. A. & amp Ugarov, V. I. nehomologní rekombinace RNA v systému bez buněk: důkaz transesterifikačního mechanismu vedeného sekundární strukturou. Buňka 88, 503–513 (1997).

Gallei, A., Pankraz, A., Thiel, H. J. & amp Becher, P. RNA rekombinace in vivo v nepřítomnosti virové replikace. J. Virol. 78, 6271–6281 (2004).

Gmyl, A. P. a kol. Nereplikační rekombinace RNA v polioviru. J. Virol. 73, 8958–8965 (1999).

McDonald, S. M. & Patton, J. T. Sortiment a balení segmentovaného rotavirového genomu. Trendy Microbiol. 19, 136–144 (2011).

Nibert, M. L., Margraf, R. L. & amp Coombs, K. M. Nonrandom segregace rodičovských alel v reovirových reassortantech. J. Virol. 70, 7295–7300 (1996).

Qiu, W. P., Geske, S. M., Hickey, C. M. & Moyer, J. W. Tomato spotted wilt Tospovirus genom reasortment a genom segment-specific adaptation. Virologie 244, 186–194 (1998).

Urquidi, V. & amp Bishop, D. H. Non-random reassortment between the tripartite RNA genom of La Crosse and snowshoe hare virus. J. Gen. Virol. 73, 2255–2265 (1992).

Roossinck, M. J. Symbióza versus konkurence v evoluci rostlinného viru. Nature Rev.Mikrobiol. 3, 917–924 (2005).

González-Jara, P., Fraile, A., Canto, T. & García-Arenal, F. Mnohonásobnost infekce rostlinným virem se mění během kolonizace jeho eukaryotického hostitele. J. Virol. 83, 7487–7494 (2009).

Miyashita, S. & amp Kishino, H. Odhad velikosti genetických překážek v pohybu buněk mezi buňkami Virus mozaiky pšenice přenášený z půdy a možnou roli úzkých míst při zrychlování výběru variací v trans-působící geny nebo prvky. J. Virol. 84, 1828–1837 (2010).

García-Arriaza, J., Manrubia, S. C., Toja, M., Domingo, E. & amp Escarmís, C. Evoluční přechod k defektním RNA, které jsou infekční komplementací. J. Virol. 78, 11678–11685 (2004).

Drummond, D. A., Silberg, J. J., Meyer, M. M., Wilke, C. O. & amp Arnold, F. H. O konzervativní povaze intragenní rekombinace. Proč. Natl Acad. Sci. USA 102, 5380–5385 (2005). Důležitý dokument zkoumající relativní dopad mutace a rekombinace na funkčnost proteinů.

Voigt, C. A., Martinez, C., Wang, Z. G., Mayo, S. L. & amp Arnold, F. H. Proteinové stavební bloky konzervované rekombinací. Přírodní struktura. Biol. 9, 553–558 (2002).

Escriu, F., Fraile, A. & amp García-Arenal, F. Omezení genetické výměny podporují společnou adaptaci genu ve tripartitním RNA viru. PLoS Pathog. 3, e8 (2007).

Pringle, C. R., Lees, J. F., Clark, W. & amp Elliott, R. M. Přeskupení podjednotky genomu mezi bunyaviry analyzovanými bodovou hybridizací pomocí molekulárně klonovaných komplementárních sond DNA. Virologie 135, 244–256 (1984).

Mansky, L. M. Míry mutací retrovirů a jejich role v genetické variaci. J. Gen. Virol. 79, 1337–1345 (1998).

Neher, R. A. & amp Leitner, T. Rychlost rekombinace a selekční síla v evoluci HIV u pacienta. Výpočet PLoS. Biol. 6, e1000660 (2010).

Shriner, D., Rodrigo, A. G., Nickle, D. C. & Mullins, J. I. Pervasive genomic recombination of HIV-1 in vivo. Genetika 167, 1573–1583 (2004).

Savolainen-Kopra, C. & amp Blomqvist, S.Mechanismy genetické variace u poliovirů. Rev. Med. Virol. 20, 358–371 (2010).

Lai, M. M., Pearlman, S. & Anderson, L. J. in Obory virologie 5th edn (eds Howley, P. M. & Knipe, D. M.) 1305–1335 (Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, USA, 2007).

Urbanowicz, A. a kol. Homologní křížení mezi molekulami bromovirových bromovirových segmentů RNA1 nebo RNA2 in vivo. J. Virol. 79, 5732–5742 (2005).

Gibbs, A. & amp. Ohshima, K. Potyviruses a digitální revoluce. Annu. Phytopathol. 48, 205–223 (2010).

Tomimura, K. a kol. Srovnání genetické struktury populací tuřínového mosaic viru v západní a východní Eurasii. Virologie 330, 408–423 (2004).

Holmes, E. C., Worobey, M. & Rambaut, A. Fylogenetické důkazy pro rekombinaci ve viru dengue. Mol. Biol. Evol. 16, 405–409 (1999).

Taucher, C., Berger, A. & Mandl, C. W. A trans-komplementující rekombinační past ukazuje nízkou náchylnost flavivirů k intermolekulární rekombinaci. J. Virol. 84, 599–611 (2010).

Tolou, H. J. a kol. Důkaz pro rekombinaci v přirozených populacích viru dengue typu 1 na základě analýzy kompletních sekvencí genomu. J. Gen. Virol. 82, 1283–1290 (2001).

Uzcategui, N.Y. a kol. Molekulární epidemiologie viru dengue typu 2 ve Venezuele: důkaz pro in situ evoluce a rekombinace viru. J. Gen. Virol. 82, 2945–2953 (2001).

Reiter, J. a kol. Rekombinace RNA viru hepatitidy C v buněčné kultuře. J. Hepatol. 17. února 2011 (doi: 10.1016/j.jhep.2010.12.038).

Chare, E.R., Gould, E.A. & Holmes, E.C. Fylogenetická analýza odhaluje nízkou míru homologní rekombinace u RNA virů s negativním smyslem. J. Gen. Virol. 84, 2691–2703 (2003). Studie, která pomocí srovnávací fylogenetické analýzy ukazuje nízkou rychlost rekombinace u ( -) ssRNA virů.

McCarthy, A. J., Shaw, M. A. & amp Goodman, S. J. Evoluce patogenu a vznik onemocnění u masožravců. Proč. Biol. Sci. 274, 3165–3174 (2007).

Boni, M. F., de Jong, M. D., van Doorn, H. R. & amp Holmes, E. C. Pokyny pro identifikaci homologních rekombinačních událostí ve viru chřipky A. PLOS ONE 5, e10434 (2010).

Hatchette, T. F. a kol. Viry chřipky A u divokých kanadských kachen: rozsáhlé přetřídění v přírodě. J. Gen. Virol. 85, 2327–2337 (2004).

Lindstrom, S. E., Cox, N. J. & Klimov, A. Genetická analýza lidských virů chřipky H2N2 a časných virů chřipky H3N2, 1957–1972: důkazy pro genetickou divergenci a mnohočetné přeskupení. Virologie 328, 101–119 (2004).

Xu, X. a kol. Přeskupení a evoluce současných virů lidské chřipky A a B. Virus Res. 103, 55–60 (2004).

Jetzt, A. E. a kol. Vysoká míra rekombinace v genomu viru lidské imunodeficience typu 1. J. Virol. 74, 1234–1240 (2000).

Jung, A. a kol. Rekombinace: zmnožení infikovaných buněk sleziny u pacientů s HIV. Příroda 418, 144 (2002).

Nemirov, K. a kol. Izolace a charakterizace dobravského hantaviru neseného myší pruhovanou polní (Apodemus agrarius) v Estonsku. J. Gen. Virol. 80, 371–379 (1999).

Vieth, S., Torda, A. E., Asper, M., Schmitz, H. & amp Gunther, S. Sekvenční analýza L RNA viru Lassa. Virologie 318, 153–168 (2004).

Miranda, G. J., Azzam, O. & amp Shirako, Y. Srovnání nukleotidových sekvencí mezi severními a jižními filipínskými izoláty viru kaskadérské rýže naznačuje výskyt přirozeného genetického přeskupení. Virologie 266, 26–32 (2000).

Rabadan, R., Levine, A. J. & amp Krasnitz, M. Non-random reassortment in human influenza A virus. Chřipka Jiné dých. Viry 2, 9–22 (2008).

Iturriza-Gómara, M., Isherwood, B., Desselberger, U. & Gray, J. Přeskupení in vivo: hnací síla pro rozmanitost kmenů lidských rotavirů izolovaných ve Spojeném království v letech 1995 až 1999. J. Virol. 75, 3696–3705 (2001).

Watanabe, M., Nakagomi, T., Koshimura, Y. & amp Nakagomi, O. Přímý důkaz pro přeskupení segmentu genomu mezi souběžně cirkulujícími kmeny lidského rotaviru. Oblouk. Virol. 146, 557–570 (2001).

Horimoto, T. & Kawaoka, Y. Influenza: lessons from past pandemics, warnings from current incidents. Nature Rev. Microbiol. 3, 591–600 (2005).

McDonald, S. M. et al. Evolutionary dynamics of human rotaviruses: balancing reassortment with preferred genome constellations. PLoS Pathog. 5, e1000634 (2009).

Silander, O. K. et al. Widespread genetic exchange among terrestrial bacteriophages. Proč. Natl Acad. Sci. USA 102, 19009–19014 (2005).

Rice, W. R. Experimental tests of the adaptive significance of sexual recombination. Nature Rev. Genet. 3, 241–251 (2002).

Burt, A. Perspective: sex, recombination, and the efficacy of selection – was Weismann right? Vývoj 54, 337–351 (2000).

Gu, Z., Gao, Q., Faust, E. A. & Wainberg, M. A. Possible involvement of cell fusion and viral recombination in generation of human immunodeficiency virus variants that display dual resistance to AZT and 3TC. J. Gen. Virol. 76, 2601–2605 (1995).

Kellam, P. & Larder, B. A. Retroviral recombination can lead to linkage of reverse transcriptase mutations that confer increased zidovudine resistance. J. Virol. 69, 669–674 (1995).

Moutouh, L., Corbeil, J. & Richman, D. D. Recombination leads to the rapid emergence of HIV-1 dually resistant mutants under selective drug pressure. Proč. Natl Acad. Sci. USA 93, 6106–6111 (1996).

Yusa, K., Kavlick, M. F., Kosalaraksa, P. & Mitsuya, H. HIV-1 acquires resistance to two classes of antiviral drugs through homologous recombination. Antiviral Res. 36, 179–189 (1997).

Kalinina, O., Norder, H., Mukomolov, S. & Magnius, L. O. A natural intergenotypic recombinant of hepatitis C virus identified in St. Petersburg. J. Virol. 76, 4034–4043 (2002).

Noppornpanth, S. et al. Identification of a naturally occurring recombinant genotype 2/6 hepatitis C virus. J. Virol. 80, 7569–7577 (2006).

Sentandreu, V. et al. Evidence of recombination in intrapatient populations of hepatitis C virus. PLOS ONE 3, e3239 (2008).

Sanjuan, R., Nebot, M. R., Chirico, N., Mansky, L. M. & Belshaw, R. Viral mutation rates. J. Virol. 84, 9733–9748 (2010).

Miralles, R., Gerrish, P. J., Moya, A. & Elena, S. F. Clonal interference and the evolution of RNA viruses. Věda 285, 1745–1747 (1999). An important experimental demonstration of clonal interference in RNA viruses.

Pepin, K. M. & Wichman, H. A. Experimental evolution and genome sequencing reveal variation in levels of clonal interference in large populations of bacteriophage phiX174. BMC Evol. Biol. 8, 85 (2008).

Poon, A. & Chao, L. Drift increases the advantage of sex in RNA bacteriophage phi6. Genetika 166, 19–24 (2004).

Muller, H. J. The relation of recombination to mutational advance. Mutat. Res. 106, 2–9 (1964).

Chao, L. Fitness of RNA virus decreased by Muller's ratchet. Příroda 348, 454–455 (1990). A classic demonstration of the occurrence of Muller's ratchet in an experimental RNA virus population.

Chao, L. in The Evolutionary Biology of Viruses (ed. Morse, S. S.) 233–250 (Raven, New York,1994).

Chao, L., Tran, T. T. & Matthews, C. Muller's ratchet and the advantage of sex in the RNA virus phi-6. Vývoj 46, 289–299 (1992).

Chao, L. & Tran, T. T. The advantage of sex in the RNA virus phi6. Genetika 147, 953–959 (1997).

Lázaro, E., Escarmís, C., Pérez-Mercader, J., Manrubia, S. C. & Domingo, E. Resistance of virus to extinction on bottleneck passages: study of a decaying and fluctuating pattern of fitness loss. Proč. Natl Acad. Sci. USA 100, 10830–10835 (2003).

Keightley, P. D. & Eyre-Walker, A. Deleterious mutations and the evolution of sex. Věda 290, 331–333 (2000).

Kondrashov, A. S. Deleterious mutations and the evolution of sexual reproduction. Příroda 336, 435–440 (1988). A seminal report outlining the mutational deterministic hypothesis for the evolution of sexual reproduction.

Duffy, S., Shackelton, L. A. & Holmes, E. C. Rates of evolutionary change in viruses: patterns and determinants. Nature Rev. Genet. 9, 267–276 (2008).

Elena, S. F. Little evidence for synergism among deleterious mutations in a nonsegmented RNA virus. J. Mol. Evol. 49, 703–707 (1999).

Pybus, O. G. et al. Phylogenetic evidence for deleterious mutation load in RNA viruses and its contribution to viral evolution. Mol. Biol. Evol. 24, 845–852 (2007).

Bonhoeffer, S., Chappey, C., Parkin, N. T., Whitcomb, J. M. & Petropoulos, C. J. Evidence for positive epistasis in HIV-1. Věda 306, 1547–1550 (2004). An important study showing that positive (antagonistic) epistasis occurs in HIV and, hence, that recombination is unlikely to be selected as a way of purging deleterious mutations.

Burch, C. L., Turner, P. E. & Hanley, K. A. Patterns of epistasis in RNA viruses: a review of the evidence from vaccine design. J. Evol. Biol. 16, 1223–1235 (2003).

Sanjuan, R., Moya, A. & Elena, S. F. The contribution of epistasis to the architecture of fitness in an RNA virus. Proč. Natl Acad. Sci. USA 101, 15376–15379 (2004).

Shapiro, B., Rambaut, A., Pybus, O. G. & Holmes, E. C. A phylogenetic method for detecting positive epistasis in gene sequences and its application to RNA virus evolution. Mol. Biol. Evol. 23, 1724–1730 (2006).

Elena, S. F., Carrasco, P., Daros, J. A. & Sanjuan, R. Mechanisms of genetic robustness in RNA viruses. EMBO Rep. 7, 168–173 (2006).

Turner, P. E. & Chao, L. Sex a vývoj intrahostitelské konkurence v RNA viru phi6. Genetika 150, 523–532 (1998).

Fulton, R. W. Practices and precautions in the use of cross protection for plant-virus disease control. Annu. Phytopathol. 24, 67–81 (1986).

Nethe, M., Berkhout, B. & van der Kuyl, A. C. Retroviral superinfection resistance. Retrovirology 2, 52 (2005).

Lee, Y. M., Tscherne, D. M., Yun, S. I., Frolov, I. & Rice, C. M. Dual mechanisms of pestiviral superinfection exclusion at entry and RNA replication. J. Virol. 79, 3231–3242 (2005).

Adams, R. H. & Brown, D. T. BHK cells expressing Sindbis virus-induced homologous interference allow the translation of nonstructural genes of superinfecting virus. J. Virol. 54, 351–357 (1985).

Karpf, A. R., Lenches, E., Strauss, E. G., Strauss, J. H. & Brown, D. T. Superinfection exclusion of alphaviruses in three mosquito cell lines persistently infected with Sindbis virus. J. Virol. 71, 7119–7123 (1997).

Michod, R. E., Bernstein, H. & Nedelcu, A. M. Adaptive value of sex in microbial pathogens. Infikovat. Genet. Evol. 8, 267–285 (2008). An article that outlines the repair hypothesis for the evolution of sexual reproduction and applies it to microbial populations, including RNA viruses.

Coffin, J. M. Structure, replication, and recombination of retrovirus genomes: some unifying hypotheses. J. Gen. Virol. 42, 1–26 (1979).

Xu, H. & Boeke, J. D. High-frequency deletion between homologous sequences during retrotransposition of Ty elements in Saccharomyces cerevisiae. Proč. Natl Acad. Sci. USA 84, 8553–8557 (1987).

Hu, W. S. & Temin, H. M. Effect of gamma radiation on retroviral recombination. J. Virol. 66, 4457–4463 (1992).

Novella, I. S., Ball, L. A. & Wertz, G. W. Fitness analyses of vesicular stomatitis strains with rearranged genomes reveal replicative disadvantages. J. Virol. 78, 9837–9841 (2004).

Spann, K. M., Collins, P. L. & Teng, M. N. Genetic recombination during coinfection of two mutants of human respiratory syncytial virus. J. Virol. 77, 11201–11211 (2003).

Archer, A. M. & Rico-Hesse, R. High genetic divergence and recombination in Arenaviruses from the Americas. Virologie 304, 274–281 (2002).

Charrel, R. N. et al. Phylogeny of New World arenaviruses based on the complete coding sequences of the small genomic segment identified an evolutionary lineage produced by intrasegmental recombination. Biochem. Biophys. Res. Komun. 296, 1118–1124 (2002).

Wittmann, T. J. et al. Isolates of Zaire ebolavirus from wild apes reveal genetic lineage and recombinants. Proč. Natl Acad. Sci. USA 104, 17123–17127 (2007).

Sawicki, S. G., Sawicki, D. L. & Siddell, S. G. A contemporary view of coronavirus transcription. J. Virol. 81, 20–29 (2007).

Onafuwa-Nuga, A. & Telesnitsky, A. The remarkable frequency of human immunodeficiency virus type 1 genetic recombination. Mikrobiol. Mol. Biol. Rev. 73, 451–480 (2009).

Kondrashov, A. S. & Crow, J. F. Haploidy or diploidy: which is better? Příroda 351, 314–315 (1991).

Otto, S. P. & Goldstein, D. B. Recombination and the evolution of diploidy. Genetika 131, 745–751 (1992).

Perrot, V., Richerd, S. & Valero, M. Transition from haploidy to diploidy. Příroda 351, 315–317 (1991).

Froissart, R. et al. Recombination every day: abundant recombination in a virus during a single multi-cellular host infection. PLoS Biol. 3, e89 (2005).

Hudson, R. R. Estimating the recombination parameter of a finite population model without selection. Genet. Res. 50, 245–250 (1987).

Hudson, R. R. Two-locus sampling distributions and their application. Genetika 159, 1805–1817 (2001).

McVean, G., Awadalla, P. & Fearnhead, P. A coalescent-based method for detecting and estimating recombination from gene sequences. Genetika 160, 1231–1241 (2002).

Simon-Loriere, E. et al. Molecular mechanisms of recombination restriction in the envelope gene of the human immunodeficiency virus. PLoS Pathog. 5, e1000418 (2009).

Nikolaitchik, O. A., Galli, A., Moore, M. D., Pathak, V. K. & Hu, W. S. Multiple barriers to recombination between divergent HIV-1 variants revealed by a dual-marker recombination assay. J. Mol. Biol. 407, 521–531 (2011).

Motomura, K., Chen, J. & Hu, W. S. Genetic recombination between human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and HIV-2, two distinct human lentiviruses. J. Virol. 82, 1923–1933 (2008).

Marsh, G. A., Rabadan, R., Levine, A. J. & Palese, P. Highly conserved regions of influenza a virus polymerase gene segments are critical for efficient viral RNA packaging. J. Virol. 82, 2295–2304 (2008).

Simon-Loriere, E., Martin, D. P., Weeks, K. M. & Negroni, M. RNA structures facilitate recombination-mediated gene swapping in HIV-1. J. Virol. 84, 12675–12682 (2010).

Weaver, S. C. Evolutionary influences in arboviral disease. Curr. Horní. Mikrobiol. Immunol. 299, 285–314 (2006).

Jackwood, M. W. et al. Emergence of a group 3 coronavirus through recombination. Virologie 398, 98–108 (2010).

Martin, G. S. The road to Src. Onkogen 23, 7910–7917 (2004).


Podívejte se na video: Cytogenetika I - viry (Červenec 2022).


Komentáře:

  1. Stigols

    Myslím, že dělám chyby. Zkusme to diskutovat. Napište mi v PM.

  2. Somer

    Mezi námi mluvíme odpovědí na vaši otázku, kterou jsem našel na Google.com

  3. Moketavato

    Lituji, že nemohu nic dělat. Doufám, že najdete správné řešení.



Napište zprávu