Volitelné

Polymerázová řetězová reakce - PCR



PCR: důležitá genetická technika

Co je to (definice)

Technika PCR je založena na amplifikaci - in vitro - jediné sekvence DNA milionkrát.

V podstatě vytvoří několik kopií požadovaného fragmentu DNA, který bude studován.

Příklad

Pokud bychom se podívali pouze na DNA extrahovanou z buňky, bylo by velmi obtížné najít fragment zájmu; Jinými slovy, bylo by téměř nemožné identifikovat tuto konkrétní část DNA.

Jednoduše řečeno, můžete říci, že pomocí techniky PCR je možné „hučet“ a vidět pouze tu důležitou část.

Aplikace

Aplikace metody PCR je mnoho av nejrůznějších oblastech. Zde je několik příkladů:

- diagnostika infekčních a genetických chorob;

- Stanovení genetické variability;

- Sexing embryí;

- Studium genové exprese;

- forenzní vyšetřování;

- Stanovení počtu zvířat;

- Identifikace patogenů, otcovství atd.

Jak se to stane

PCR probíhá ve třech krocích a všechny závisí na teplotním gradientu.

Krok 1: Denaturace (při 95 ° C) dvouřetězcového řetězce DNA, ke kterému dochází v důsledku zvýšení teploty.

Krok 2: Základní nátěr (57 ° C až 63 ° C) primerů, k nimž může dojít v teplotním rozmezí 57 ° C až 63 ° C.

Krok 3: Prodloužení (při 72 ° C) s operací polymerázy Taq, která pomáhá při zavádění nukleotidů, které budou doplňovat syntetizovaný řetězec.

Závěr

Normální PCR má asi 36 cyklů, z nichž každý zahrnuje výše popsané tři kroky. A s každým cyklem dochází k exponenciálnímu množení nebo zesílení množství molekul DNA.

Pokud například v prvním cyklu zahajujeme PCR pouze s jednou molekulou DNA, nakonec budeme mít dvě molekuly. Na konci druhého cyklu budeme mít čtyři. Na konci třetí budeme mít osm molekul a tak exponenciálně.

Na konci 36 cyklů budeme mít miliardy kopií DNA, které lze analyzovat v laboratoři. Tato analýza se provede pomocí Elektroforéza.